De film concentreert zich op de gevolgen die het schilderen van de Nachtwacht op het leven van Rembrandt had. 'De Nachtwacht betekende het begin van het einde voor hem,' stelt producent Kasander. 'Niet veel mensen kennen dat verhaal .'

Greenaway omschrijft Nightwatching als een detective-verhaal waarin Rembrandt de rol speelt van Sherlock Holmes. Greenaway: 'Op de Nachtwacht wordt een musketschot gelost, maar wie wordt er neer geschoten en waarom?' De Nachtwacht is, volgens Greenaway, te vergelijken met de Zapruderfilm, waarop de moord op John F. Kennedy te zien is. Nightwatching geeft een beeld van de Nederlandse maatschappij in de Gouden Eeuw en leunt daarbij visueel op het werk van de Nederlandse meesterschilders.

De rol van Rembrandt van Rijn zal worden gespeeld door Martin Freeman. Volgens Greenaway heeft Freeman in zijn eerdere komische rollen in The Office en The Hitchhiker's Guide to the Galaxy bewezen over een uitstekend gevoel voor timing te beschikken. 'Freeman lijkt op Rembrandts zelfportretten. Hij heeft hetzelfde lichaam en dezelfde vragende blik als Rembrandt.'

Nightwatching is onderdeel van een ambitieus vierluik dat bestaat uit een film, documentaire, tentoonstelling en een opera, die tijdens het Rembrandtjaar 400 zouden worden opgevoerd. De tentoonstelling, getiteld Nightwatching in het Rijksmuseum, zal het Holland Festival (2 juni t/m 25 juni) openen. Greenaway had dialogen uit de film willen gebruiken in de levende tentoonstelling, maar door de uiteenlopende tijdsschema's van de verschillende projecten was dit niet meer haalbaar.

De opnames voor Nightwatching beginnen eind juni in Polen en Nederland en de verwachting is dat de film op het filmfestival van Cannes 2007 in première gaat. De tentoonstelling is van 2 juni tot 6 augustus te zien in het Rijksmuseum. De opera gaat in de loop van 2007 in première en de documentaire zal wellicht op het IDFA 2006 vertoond worden.